農(nóng)藥殘留的免疫學技術檢測食品的范圍很廣,包括水果、蔬菜、飲料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、動植物油、蜂蜜、豆類、谷物等。國外還推出了多種酶標試劑盒應用于常規(guī)分析及田間檢測的快速篩選,作為儀器分析的輔助方法發(fā)揮了一定的作用。免疫分析法作為農(nóng)藥殘留快速篩選檢測方法受到重視。
免疫技術為20世紀90年代優(yōu)先研究、開發(fā)和利用的農(nóng)藥殘留分析技術,世界糧農(nóng)組織(FAO)已向許多國家推薦此項技術。免疫分析法(immunoassay,IA)是將免疫反應與現(xiàn)代測試手段相結合而建立的超微量測定技術。
免疫分析法是生物酶技術、熒光光譜技術、輻射技術、免疫分析技術應用于農(nóng)藥殘留分析領域的一門新技術,是基于抗原和抗體之間的特異性識別和結合反應為基礎的一種微量分析方法。免疫是機體識別和排除進人體內的抗原性異物的保護性應答反應。較大分子的農(nóng)藥可以直接作為抗原進入脊椎動物的體內產(chǎn)生免疫應答,從而得到可以和該農(nóng)藥分子特異性結合的抗體;小分子量的農(nóng)藥(相對分子質量<2500)一般不具備免疫原性,不能刺激動物產(chǎn)生免疫反應,但有與相應抗體在體外發(fā)生吸附反應的能力,即有反應原性,這類小分子物質在免疫學上稱為半抗原。
農(nóng)藥是半抗原,一般不具備抗原性,不能刺激動物產(chǎn)生免疫反應,需要首先將該小分子通過與一定碳鏈長度、大分子的載體蛋白質(通常使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、卵清蛋白)以共價鍵偶聯(lián)制備成人工抗原,使動物產(chǎn)生免疫反應,產(chǎn)生識別該農(nóng)藥并與之特異性結合的抗體。以共價鍵偶聯(lián)成人工抗原使動物產(chǎn)生免疫反應從而產(chǎn)生識別該農(nóng)藥并與之相結合的抗體(多克隆抗體),通過對半抗原或抗體進行標記(酶、熒光物質、放射性同位素等),利用標記物的生物、物理、化學放大作用,對樣品中的特定的農(nóng)藥殘留進行定性或定量檢測。
通過對半抗原或抗體進行標記(放射性核素、酶、熒光素標記等),利用標記物的生物或物理或化學放大作用來進行工作,它集測定的高靈敏性和抗體反應的強特異性于一體。它的開發(fā)過程需要投入較多資金和較長時間,但具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強、價廉、樣品所需量少等優(yōu)點。目前多用于單一農(nóng)藥殘留檢測,不適合應用于多殘留檢測。
1971年Ercegovich[塢。]*先討論了農(nóng)藥DDT、馬拉硫磷及氨三唑(amino—triazole)的免疫測定。隨后,大量研究免疫分析法在農(nóng)藥殘留中的應用。Kun等報道了利用免疫分析測定對硫磷殺蟲劑農(nóng)藥殘留,檢測限達到26ng/mL,相對標準偏差小于10 9/6。Laura等[塢0]報道利用化學發(fā)光免疫分析(cL—IA)測定農(nóng)藥殘留。Anne等報道用非同位素免疫分析法(cMIA)測定氯麥隆殺蟲劑,采用傅里葉變換紅外光譜(FTIR)作為檢測器,極大提高靈敏度。
農(nóng)藥殘留的免疫學技術檢測食品的范圍很廣,包括水果、蔬菜、飲料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、動植物油、蜂蜜、豆類、谷物等。一些商品化的試劑盒也相繼開發(fā)出來。國家農(nóng)業(yè)部環(huán)保所李治祥和黃土忠于1990年研制了農(nóng)藥殘毒速測箱,其原理就是有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對動物和昆蟲的致毒作用是通過特異性抑制膽堿酯酶(chE)來實現(xiàn)的。將chE與樣品提取液反應,若chE受到抑制,表明樣品提取液中含有OPS和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,這時基質不能水解,就不能變色;否則ChE不受到抑制,基質水解產(chǎn)生藍色。另外,國外還推出了多種酶標試劑盒應用于常規(guī)分析及田間檢測的快速篩選,作為儀器分析的輔助方法發(fā)揮了一定的作用。免疫分析法作為農(nóng)藥殘留快速篩選檢測方法受到重視。
原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術發(fā)展有限公司