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5月初-上海恒遠(yuǎn)為您講解磷脂酰絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)品有哪些用途及方法

點(diǎn)擊次數(shù)：15157 發(fā)布時間：2014/5/13 9:50:03

磷脂酰絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)品性狀：磷脂酰絲氨酸，CAS 51446-62-9淡黃或黃色粉末，能乳化于水。不溶于乙醇、甲醇；溶于氯仿、石油醚。人工合成物僅溶于氯仿。

磷脂酰絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)品用途：磷脂酰絲氨酸用于生化研究。磷脂化合物中的磷酸甘油酯類，是細(xì)胞膜組分，如人紅細(xì)胞膜上就有磷脂酰膽堿（占19%）、鞘磷脂（占8%）、磷脂酰乙醇胺（占16%）和磷脂酰絲氨酸（占10%）。并且只有后者在細(xì)胞膜上具有凈負(fù)電荷，有助于膜的不對稱性。還能活化已損傷表面凝血酶原。并與磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺在體內(nèi)可互相轉(zhuǎn)化。

磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中（圖3）。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素（FITC、PE）或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

碘化丙啶（propidine iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。

磷脂酰絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)品方法：

1、懸浮細(xì)胞的染色：將正常培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡的懸浮細(xì)胞（0.5~1×106）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC標(biāo)記的Annexin-V（20ug/ml）10ul,室溫避光30min,再加入PI（50ug/ml）5ul,避光反應(yīng)5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)定量檢測（一般不超過1h），同時以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作為陰性對照。

2、貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗滌、染色和分析同懸浮細(xì)胞。

3、爬片細(xì)胞染色：同上，*后用熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡進(jìn)行觀察。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司