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技術(shù)文章

恒遠(yuǎn)為您總結(jié)ELISA實驗失敗的原因

點擊次數(shù)：14735   發(fā)布時間：2021/2/3 9:45:49

elisa試劑盒實驗也同樣如此，成功的實驗是個循序漸進(jìn)的過程，影響ELISA實驗結(jié)果的因素有很多，只有的掌握了實驗的細(xì)節(jié)，才能購做出完美的實驗。您可知您的ELISA試劑盒實驗為什么會失敗？天文章的內(nèi)容中，小編將為您找找其中的原因。
 
第yi、標(biāo)本的影響
    溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以完全洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
 
第二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
    因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
 
第三、標(biāo)本保存不當(dāng)
    在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4
℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強烈振蕩。
 
第四、標(biāo)本凝固不全
    在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。 
 

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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