本試劑盒僅供研究使用
特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人血清素/血清胺（ST），且與其他相關蛋白無交叉反應。
有效期：6 個月
預期應用：ELISA 法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中血清素/血清胺（ST）含
量。
說明
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。
2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。
4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗ST 抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化
的抗ST 抗體、HRP 標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化
成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ST 呈正相關。用酶標儀在450nm 波
長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯板（Assay plate ）：一塊（96 孔）。
2. 標準品（Standard）：2 瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25 倍。
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof 管
5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2 小時或4℃過夜后于1000 x g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或將標本
放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后30 分鐘內于2 - 8° C 1000 x g 離心15 分鐘，或將標本
放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃
保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響*后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則：
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，
檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。*后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度
應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則：2 瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10 分鐘以上，然后反復顛倒/
搓動以助溶解，其濃度為200 ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，
12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml，臨用前15 分鐘內配制。
如配制100 ng/ml 標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）200 ng/ml 的上述標準品加入含0.5ml 樣品稀釋液的
Eppendorf 管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則：
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl） ，
實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl 生物素標記抗體加990μl 生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕
混勻，在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每
孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根過氧化物酶標記親和素加990μl 辣根過氧化物酶
標記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。
操作步驟
實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都
應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品
100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋
或覆膜，37℃反應120 分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl 生物素標記抗體加99μl 生物
素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60 分鐘。
3. 溫育60 分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60 分鐘。
5. 溫育60 分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30 分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4 孔有明顯的梯度藍
色，后3-4 孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入
順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度（OD 值）。在加終止液后15 分鐘以內進行檢測。
注：
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是*后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用
此孔調OD 值至零。
3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記
親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣
根過氧化物酶標記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下
用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml 注入孔內，浸泡1-2 分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD 值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，
根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準
曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實
際濃度。
注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。
5. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請*后乘以稀釋倍數。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑

原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司