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恒遠(yuǎn)生物|常用生化試劑的作用

點(diǎn)擊次數(shù):14366   發(fā)布時(shí)間:2022/5/5 17:14:45

 1、蛋白酶 K:能水解消化蛋白質(zhì),特別是與 DNA 結(jié)合的組蛋白,在尿素和 SDS 中穩(wěn)定。一般工作濃度是50-100uq/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl(pH7.5) 10mM CaCl2
 
2、SDS:十二烷基硫酸鈉,溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,并解離細(xì)胞中的核蛋白,SDS還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。
 
3、IPTG:異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍(lán)白斑篩選及 IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等。IPTG 和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋自結(jié)合,使阻遇蛋白的空間構(gòu)像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,IPTG 不被 β半乳糖苷酶水解。常與 X-GAL 一起用于藍(lán)白斑篩選。作用強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定。
 
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是 IPTG 的顯色試劑,在IPTG 的催化下顯藍(lán)色。常跟 IPTG 一起用與藍(lán)白斑篩選。
 
5、G418:一種抗生素,對幾乎所有的細(xì)胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的選擇試劑。當(dāng) neo 基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方后,則能啟動 neo 基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為 mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá),使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418 的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418 的這一選擇特性,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應(yīng)用。
 
6、DMSO:二甲基亞砜。實(shí)驗(yàn)室常用于作液體層析溶劑,同時(shí)用作測試物質(zhì)紫外消光值上時(shí)用作參照物。能溶于所有烷烴和烯烴。
 
7、曲拉通 X-100:TritonX-100,用的細(xì)胞裂解液成分,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用, 能力介于 NP40 和 SDS 之間,偏向于NP40。
 
8、NP-40:很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的 buffer 可以獲得胞漿蛋白。
 
9、BSA:牛血清白蛋白, 主要起維持滲透壓作用、PH 緩沖作用,載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液。
 
10、甲酰胺:甲酰胺被用作凝膠電泳中 RNA 的穩(wěn)定劑,也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股 DNA。
 
11、TEMED:四甲基乙二胺。促凝劑。在中性及堿性 pH 條件下,加入 TEMED 可加速凝膠聚合。
 
12、巰基乙醇:一種強(qiáng)還原劑。可還原蛋白二硫鍵,從而使蛋白保持溶解狀態(tài),有利于與 SDS 的結(jié)合。使蛋白解離成單個(gè)亞基。
 
13、甲叉雙丙烯酰胺:N,N'-甲叉雙丙烯酰胺,別名 MBA,又叫亞甲基雙丙烯酰胺,次甲基雙丙烯酰胺,N,N'-甲撐雙丙烯酰胺。作交聯(lián)劑與丙烯酰胺聚合而制備聚丙烯酰胺凝膠。
 
14、過硫酸銨:過硫酸銨(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝劑 TEMED 的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。
 
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