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閱讀次數：1578 發布時間：2012/9/17 9:38:09
一. 液體培養法 1. 將指定之寄主細菌以液體培養法于適當溫度下培養，一般培養16~24小時 2. 將噬菌體原液100 μl 與寄主細菌懸浮液300 μl均勻混合，靜置15分鐘使其感染。 3. 將混合液接至含10 ml新鮮液體培養基的試管中，于適當溫度下振蕩培養約8~24小時，培養時間依噬菌體之不同而異。 4. 將培養液移入離心管中，以10,000 rpm （5,000 g）離心10分鐘，以沉淀寄主細菌。 5. 將上清液移至新管中，以0.22μm孔徑之過濾器（filter）去除殘余菌體，即得不含寄主細菌之噬菌體原液。但因噬菌體原液呈透明狀，無法以肉眼直接判斷其增殖效果，故應測定其效價以確認增殖培養之成效。 二. 雙層瓊脂培養法 1. 將指定之寄主細菌以液體培養法于適當溫度下培養，一般培養16~24小時。 2. 將噬菌體原液100 μl 與寄主細菌懸浮液300 μl均勻混合，靜置15分鐘使其感染。 3. 將混合液加入5 ml 冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養基中，均勻混合后立即平鋪在已倒好的1.8﹪瓊脂培養基平板上。 4. 待平板凝固后移至適當溫度之培養箱中，一般培養8~24小時，培養時間依噬菌體之不同而異。 5. 以上述相同之步驟制作另一不含噬菌體之對照組。 6. 將培養好的平板與對照組比較其澄清度，一般含噬菌體之平板呈澄清狀，而僅含寄主細菌之對照組則呈混濁狀。 7. 將含有噬菌體之平板置于 -20℃下4~5小時后，取出置于室溫下解凍。 8. 將解凍后產生的液體移入離心管中，以10,000 rpm （5,000 g）離心10分鐘以沉淀寄主細菌。 9. 將上清液移至新管中，以0.22 μm孔徑之過濾器（filter）去除殘余菌體，即得不含寄主細菌之噬菌體原液。 三. 表面瓊脂培養法 1. 將指定之寄主細菌以液體培養法于適當溫度下培養，一般培養16~24小時。 2. 將寄主細菌懸浮液3 ml均勻平鋪于1.8﹪瓊脂培養基平板上，靜置2小時。 3. 將余的寄主細菌懸浮液吸出，再將噬菌體原液0.3 ml均勻涂抹于平板上。 4. 于適當溫度下培養約16~24小時，培養時間依噬菌體之不同而異。 5. 取5 ml 新鮮液體培養基加入平板中，以 L 形玻棒刮洗下平板表面之菌體。 6. 將刮洗下之液體移入離心管中，以10,000 rpm （5,000 g）離心10分鐘以沉淀寄主細菌。 7. 將上清液移至新管中，以0.22 μm孔徑之過濾器（filter）去除殘余菌體，即得不含寄主細菌之噬菌體原液。
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