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閱讀次數：1311 發布時間：2012/9/27 13:49:42
本法反應溫和，對抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應用。缺點是標記率較低，一般為20～40%。
1．原理此法是利用乳過氧化物酶（Lactoperoxidase）有促進微量過氧化氫對125I-的氧化作用，生成125I+，并標記在多肽、蛋白質酪氨酸分子上。
2．方法以標記蛋白質抗原為例。
（1）反應液組成：蛋白質2～5μg溶于磷酸緩沖液10～25μl中，加入Na125i 1m Ci（10μl）、乳過氧化物酶溶液25ng（10μl）、H2O2200ng（10μl）；
（2）在室溫保溫7min；
（3）加入H2O2200ng（10μl）；
（4）過7min再加入H2O2（3μl）；
（5）保溫7min后，加入0.5ml、10mmol/L巰基乙醇以停止反應；
（6）10min后加入NaI載體溶液1ml ；
（7）按常規方法分離純化。
3．注意事項
（1）LPO質量好壞，可直接影響標記率，LPO應在使用前新鮮配制，以防酶活性降低。
（2）LPO用量應小于總蛋白質用量的1%，以減少酶自身碘化而帶入的放化雜質。
（3）碘化反應速率分析表明，酶的催化速度很快。
（4）碘化反應在pH4.0～8.5較寬范圍內均可進行，*適pH值應依據蛋白質本身性質而定。
（5）H2O2應保持低濃度，如高于0.1mmol/L，對酶的活性將有抑制作用。
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